मल्टीवेल सेल कल्चर प्लेट्स में सीलिंग और संदूषण के मुद्दे

मल्टी-वेल सेल कल्चर प्लेट्स के लोडिंग और हैंडलिंग:

सेल कल्चर प्लेट भी सेल संचालन करते समय सख्त asepsis के सिद्धांत का अनुसरण करती है। सभी संचालन को मानकीकृत और वैज्ञानिक होना चाहिए, और सेल विकास पर अतिरिक्त प्रभाव नहीं डालेगा। सबसे आम समस्या यह है कि नमूने को जोड़ने के बाद कोशिकाओं की एकरूपता को कैसे सुनिश्चित किया जाए और कोशिकाओं के विकास की स्थिति पर माध्यम को बदलने के प्रभाव को कम किया जाए।

पूछना:
96 और 24-अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों या पेट्री व्यंजनों के ढक्कन बहुत ढीले हैं, जो वेंटिलेशन के लिए सुविधाजनक है, लेकिन क्या बैक्टीरिया, मोल्ड और अन्य प्रदूषक भी फिसलेंगे?

उत्तर:
ढक्कन बहुत ढीला है, जो अर्ध-खुले संस्कृति से संबंधित है, और इसका उद्देश्य हवादार करना है (वास्तव में, यह संस्कृति डिश के बाहर CO2 को संस्कृति डिश के साथ पूरी तरह से विनिमय करना और संस्कृति के पीएच मूल्य को बनाए रखना है मध्यम)।
सब कुछ फायदे और नुकसान हैं, जो निश्चित रूप से प्रदूषण की संभावना को बढ़ाता है। इसके अलावा, यह डिश में तरल को वाष्पित करने का कारण बनता है, जो दवाओं की सटीक खुराक के लिए उल्लेखनीय है। इसलिए, निम्नलिखित दो उपाय आवश्यक हैं: a। इनक्यूबेटर में हवा साफ होनी चाहिए (नियमित पराबैंगनी प्रकाश, अल्कोहल स्क्रबिंग, और इनक्यूबेटर को खोला जाना चाहिए और जितना संभव हो उतना कम बंद किया जाना चाहिए) बी। इनक्यूबेटर में आर्द्रता को हमेशा 100% (इनक्यूबेटर में रखा बाँझ आसुत पानी के साथ सिंक) पर रखा जाना चाहिए।
पेट्री डिश की तरह, यह एक उल्टा ढक्कन वाला एक कंटेनर भी है, और यह प्रदूषित नहीं होगा। मुख्य रूप से कवर के "एल" किनारे द्वारा उत्पन्न एयरफ्लो के नकारात्मक दबाव के कारण, धूल से जुड़े सूक्ष्मजीव होते हैं, और एयरफ्लो द्वारा की गई धूल कवर के किनारे से नहीं गुजर सकती है जो नकारात्मक दबाव उत्पन्न करता है। वेंटिलेशन प्रभाव केवल हवा के प्रसार के माध्यम से होता है, और कोई भी एयरफ्लो उत्पन्न नहीं होगा, इसलिए यह केवल सांस लेगा और बैक्टीरिया में प्रवेश नहीं करेगा।

पूछना:
24-अच्छी तरह से प्लेट का उपयोग करते हुए, कुछ कुओं (अल्ट्रा-क्लीन बेंच में) में संचालन होते हैं, और अन्य कुओं में सुसंस्कृत होने वाली कोशिकाएं हैं। मुझे चिंता है कि इससे संदूषण होगा। मैं नहीं जानता कि क्या ध्यान देना है?

उत्तर:
यदि ऑपरेशन को अल्ट्रा-क्लीन बेंच में मानकीकृत किया जाता है, तो यह ठीक होना चाहिए। मुझे लगता है कि आप कल्चर प्लेट के कवर का पूरा उपयोग कर सकते हैं, केवल संचालित होने वाले छेदों को उजागर करने की कोशिश कर सकते हैं, और अन्य छेदों को कवर के साथ कवर कर सकते हैं।
उपयोग से पहले बड़े पैमाने पर विचार करें और सभी छेदों का पूरा उपयोग करें; यदि आपको केवल कुछ छेदों का उपयोग करने की आवश्यकता है, तो आप केवल एक पक्ष का उपयोग कर सकते हैं, और बाकी को कवर के साथ कवर कर सकते हैं। मुझे पहले सही छेद का उपयोग करने के लिए उपयोग किया जाता है (यह दाहिने हाथ में नमूने जोड़ने के लिए सुविधाजनक है)।

संचालन करते समय, बोर्ड के एक तरफ को बढ़ाने के लिए कुछ ग्लास स्लाइड का उपयोग करें, कवर को पूरी तरह से न खोलें, आमतौर पर कोई समस्या नहीं है।
असमान कोशिका वितरण और समाधान

पूछना:
कोशिकाओं को संस्कृति प्लेट पर टीका लगाया जाता है, और कोशिकाएं हमेशा परिधीय भाग में इकट्ठा होती हैं, इससे कैसे निपटें?

उत्तर:
क्या मैं पूछ सकता हूं कि आपकी कोशिकाएं कैसे मिश्रित हैं? क्या यह संस्कृति की प्लेट को पाइपिंग या हिला रहा है? यदि यह उत्तरार्द्ध है, और यदि यह एक सर्कल में हिलाया जाता है, तो यह बहुत संभावना है कि कोशिकाओं को केन्द्रापसारक बल के कारण परिधीय भाग में फेंक दिया जाएगा, जिसके परिणामस्वरूप बीच में कम कोशिकाएं होंगी। चार सप्ताह से अधिक!
यहाँ एक अच्छा तरीका है: बीज की प्लेट की खेती करने से पहले, संस्कृति प्लेट को कुछ घंटों की संतृप्ति के लिए इनक्यूबेटर में डालें और फिर इसे बाहर निकालें। कोशिकाओं को रोपण करते समय बल प्रकाश होना चाहिए। धीरे -धीरे जोड़ने से सेल निलंबन को प्लेट के कुओं में प्रवाहित करने की अनुमति मिलती है, और सुसंस्कृत कोशिकाएं मूल रूप से समान रूप से बढ़ती हैं। याद रखें कि कभी भी एक शेकर के साथ हिलाएं, या आपकी कोशिकाएं एक साथ टकराएंगी जैसे आपने कहा था।
संस्कृति प्लेट का छेद व्यास जितना छोटा होगा, यह घटना उतनी ही स्पष्ट है। यह घटना 24 और 96-अच्छी तरह से प्लेटों के लिए अपरिहार्य है, क्योंकि तरल दीवार का पालन करता है ताकि कुएं में संस्कृति समाधान एक तरल स्तर नहीं बनाती है, लेकिन परिधि अधिक है, एक अवतल दर्पण की तरह। हालांकि, इन दो प्रकार की छिद्र प्लेटों का उपयोग करते समय, अतिरिक्त हस्तक्षेप की आवश्यकता के कारण पर्याप्त मात्रा में संस्कृति समाधान जोड़ना संभव नहीं है, ताकि कोशिकाएं संस्कृति समाधान के साथ मिलकर "एज कलेक्शन" दिखाई दें। यह इस बात पर निर्भर करता है कि आपको किन संकेतकों का निरीक्षण करने की आवश्यकता है। यदि यह MTT है, तो इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री सेल लेयरिंग के कारण परिणामों को प्रभावित करेगी।
कोशिकाओं को पचाते समय, सेल क्लंप से बचने के लिए समान रूप से पाइपिंग पर ध्यान दें, और कुएं में संस्कृति समाधान की मात्रा पर्याप्त होनी चाहिए। आम तौर पर, टीकाकरण करते समय पर्याप्त संस्कृति समाधान जोड़ें, और हस्तक्षेप को जोड़ते समय एक बार समाधान बदलें। हस्तक्षेप समाधान में जोड़ा गया संस्कृति समाधान की मात्रा टीकाकरण के समय संस्कृति समाधान की मात्रा के बराबर है, इस मामले में, "एज सेट" की घटना में सुधार किया जाएगा, इसलिए आप इसे आज़मा सकते हैं।

पूछना:
मैंने जो किया वह पट्टिका गठन प्रयोग था। एक समान परत में कोशिकाओं को फैलाना सबसे अच्छा है। अधिकांश छेद ठीक होते हैं जब वायरस टीका लगाया जाता है, और उनमें से कुछ समान नहीं होते हैं। सेल समूह में महान अंतर हैं। मैं आपसे यह पूछना चाहूंगा कि कोशिकाओं को जोड़ते समय आप किस विधि का उपयोग करते हैं?

उत्तर:
पाचन के बाद एकल-सेल निलंबन में कोशिकाओं को पाइप करना महत्वपूर्ण है! सुनिश्चित करें कि प्लेट को विभाजित करते समय प्रत्येक कुएं में कोशिकाओं की संख्या सुसंगत है!
बेशक, प्रसंस्करण कारक भी हैं। कुओं के बीच समानता भी बहुत महत्वपूर्ण है। उदाहरण के लिए, दवा जोड़ते समय, कमजोर पड़ने के बाद दवा को मिलाएं ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि प्रत्येक कुएं की एकाग्रता सुसंगत है!
इसके अलावा, कोशिकाओं और दवाओं को जोड़ते समय, परीक्षण समूह और नियंत्रण समूह को जोड़ा जाना चाहिए ताकि नमूनों को जोड़ने के अनुक्रम के कारण सेल घनत्व और दवा एकाग्रता में अंतर से बचने के लिए इसे जोड़ा जाना चाहिए!

पूछना:
उड़ाने से पहले से ही समान है, लेकिन तख़्त, 6 छेद, और 24 छेद हमेशा कुछ असमान होते हैं, और बीच में थोड़ा ध्यान केंद्रित करते हैं। इसके अलावा, यह स्पष्ट है कि गिनती की जाती है, और एक या दो दिन के बाद, प्रत्येक छेद का घनत्व अलग है, जो पता लगाने को प्रभावित करेगा। क्या कोई अच्छा तरीका है?

उत्तर:
यदि आप एक पाश्चर पिपेट का उपयोग करते हैं, तो हर बार बहुत अधिक चूसना न करें, क्योंकि पिपेट में कोशिकाएं स्वचालित रूप से डूब जाएंगी, अक्सर पहले कुछ छेदों में कोशिकाओं की संख्या बड़ी होती है, और सेल निलंबन अक्सर समान होता है, और तरल होगा एस-आकार मार्ग का पालन करें।
यदि आप एक पिपेट का उपयोग करते हैं, तो युक्तियों को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए युक्तियों को संसाधित और हटा दिया जाना चाहिए, ताकि हर बार तरल को लिया जाए। टिप के साथ एक-से-एक छेद जोड़ना अधिक सटीक है। लेकिन निलंबन को मिलाने पर भी ध्यान दें।

एक समानांतर समूह स्थापित करने के लिए, n काफी बड़ा होना चाहिए (आप इसकी गणना कर सकते हैं)।

चढ़ाना के बाद न हिलाएं, क्योंकि झटकों से कोशिकाओं को केंद्र की ओर एकत्र किया जाएगा। एक बार तखाना सबसे अच्छा है।

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